介紹

H5亞型禽流感抗體檢測試劑盒檢測家禽、野禽等動物血清中的H5亞型禽流感抗體，用于評估禽流感疫苗免疫狀況及感染禽類的血清學(xué)輔助診斷。

本試劑盒采用阻斷ELISA法，在酶標(biāo)板條微孔上預(yù)包被H5抗原，運用抗單克隆抗體與血清中的抗體競爭固相載體中的結(jié)合位點，從而間接檢測血清中的抗H5抗體。在實驗中，加入稀釋后的待檢血清，經(jīng)過溫育后，若樣品中含有H5抗原特異性抗體，則與包被板上的抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的抗體和其它成分后，再加入酶標(biāo)的抗H5抗體，樣本中的抗體阻斷了酶標(biāo)抗體與包被板上抗原的結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶結(jié)合物，在微孔中加入TMB底物液，經(jīng)酶催化產(chǎn)生的藍(lán)色信號與樣本中的抗體含量成反比，加入終止液終止反應(yīng)后，用酶標(biāo)儀450nm波長測定反應(yīng)孔中的吸光度A值。

組份

需自備的設(shè)備及試劑

1.    微量移液器：10μl-100μl、100μl-1000μl。

2.    一次性移液器吸頭。

3.    量筒：500ml。

4.    96孔板酶標(biāo)儀。

5.    蒸餾水或去離子水。

6.    洗瓶或洗板機。

樣品制備

取動物全血，按常規(guī)方法制備血清，要求血清清亮，無溶血。

洗滌液的準(zhǔn)備

濃縮洗滌液使用前應(yīng)恢復(fù)至室溫，如有鹽結(jié)晶，搖動使結(jié)晶的鹽溶解，然后用蒸餾水或去離子水作10倍稀釋。稀釋好的洗滌液可在4℃存放一周左右。

注意事項

1.    試劑盒使用前各試劑應(yīng)平衡至室溫，應(yīng)將試劑盒各組份放置室溫至少1小時以上。使用前應(yīng)搖勻，使用后放回2-8℃。

2.    不同品種、不同批號試劑盒的試劑組分不得混用，使用試劑時應(yīng)防止試劑污染。

3.    終止液對皮膚和眼可能有刺激性，使用時應(yīng)該注意防護(hù)。

4.    TMB（顯色液）不要暴露于強光和避免接觸氧化劑。

5.    檢測板拆封后應(yīng)避免受潮或沾水(未用完的抗原包被板加干燥劑放于自封袋中，并盡快置于2-8℃)。

6.    所有廢棄物在丟棄之前應(yīng)合理處理以免污染。

7.    嚴(yán)格遵守操作說明可以獲得最好的結(jié)果。操作過程中移液、定時和洗滌等的全部過程必須精確。

8.         抗原包被板為一次性用品，不得重復(fù)使用。

操作步驟

1.    每次試驗均設(shè)置陽性對照1孔、陰性對照2孔，陰、陽性對照不用稀釋，直接取100ul加入反應(yīng)孔。

2.    將樣品稀釋液按50ul/孔加入到微孔反應(yīng)板內(nèi)，之后將待檢樣品血清按50ul/孔加入孔內(nèi)并吹打混勻（移液器槍頭請勿混用）；

3.    蓋上封板膜（可按實際需要自行裁剪），置37℃溫育120分鐘。

4.    小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，使用工作濃度洗滌液每孔加250ul，后甩去孔內(nèi)液體，以上步驟重復(fù)6次，最后在干凈吸水紙上拍干。

5.    每孔加酶結(jié)合物100μl，蓋上封板膜，置37℃溫育30分鐘。

6.    小心揭開封板膜，甩掉板孔中的溶液，洗滌6次, 方法同4。切記最后在干凈吸水紙上拍干。

7.    每孔加顯色液100μl，混勻，蓋上封板膜37℃閉光顯色

15分鐘。

8.    每孔加終止液50μl，使反應(yīng)終止，10分鐘內(nèi)測定結(jié)果。

結(jié)果判定

用酶標(biāo)儀于450nm（630nm作參比波長）讀取吸光度OD值。

試驗成立的條件是：

陰性對照（N）OD均值>0.4；

陽性對照（P）OD值/陰性對照（N）OD均值 < 0.4。

計算方法：

樣品OD值/陰性對照OD均值=S/N值。

陰陽性判斷：

S/N值≥0.55則判斷為陰性；

S/N值<0.55則判斷為陽性。

有效期

貯存方法： 2 - 8oC下貯存。

有效期： 12個月。